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<正>邮发代号:54-33国外代号:M4191月刊,每期定价10.00元全年120.00元 《中国兽医科学》是中国农业科学院兰州兽医研究所主办的兽医专业学术类期刊。继1999年获首届国家期刊奖、2003年获第二届国家期刊奖百种重点期刊奖
2014年05期 v.44;No.441 438页 [查看摘要][在线阅读][下载 745K] [下载次数：25 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 于少雄;颜新敏;赵志荀;吴国华;叶奕优;卢昌;王曼;吴娜;朱海霞;李健;张强;
为了构建组成型表达绵羊痘病毒E3蛋白的真核表达载体,并检测E3蛋白在Vero细胞中瞬时表达的情况,将绵羊痘病毒E3L基因亚克隆至pcDNA3.1(+)表达载体,构建重组质粒pcDNA3.1(+)-E3L,经酶切和测序鉴定正确后转染至Vero细胞,利用Western-blot和间接免疫荧光试验(IFA)对E3蛋白的表达水平进行鉴定。结果显示,转染后第48小时可检测到E3L基因高水平的表达。这一研究结果为进一步研究绵羊痘病毒E3蛋白的生物学功能奠定了基础。
2014年05期 v.44;No.441 441-445页 [查看摘要][在线阅读][下载 426K] [下载次数：143 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：3 ] - 王晓旭;孙英杰;胡跃;仇旭升;谭磊;宋翠萍;王桂军;丁铲;
为掌握新城疫病毒(NDV)在原代鸡胚成纤维细胞(CEF)上诱导细胞自噬的特性,用NDV感染CEF后,以电镜观察自噬体形成、GFP-LC3荧光迁移以及Western-blot检测LC3-Ⅰ/Ⅱ转化判定自噬。p62降解和GFP-LC3向溶酶体的转移判定自噬流。结果显示,在感染后第12~24小时能在细胞中发现大量双层或单层膜结构;转染的GFP-LC3质粒在病毒感染后呈现显著的点状分布,尤其在NDV感染形成的合胞体中明显;且病毒感染后期发生明显的LC3-Ⅰ向LC3-Ⅱ的转化。NDV感染能够诱导p62蛋白的降解,共聚焦结果显示,GFP-LC3在病毒感染中后期发生向溶酶体的转移,说明NDV感染能够诱导完整自噬流的产生。结果表明,NDV感染CEF后能够强烈诱导细胞自噬发生,这为进一步研究新城疫病毒和禽源细胞互作奠定了基础。
2014年05期 v.44;No.441 446-452页 [查看摘要][在线阅读][下载 705K] [下载次数：314 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：3 ] - 江海海;邓舜洲;高洋根;张文波;万文忠;蒋新华;朱兴全;
本研究的目的是分离鉴定江西省某猪场猪感染的弓形虫虫株并研究其多位点基因型。以江西省某猪场病死的后备母猪肺门淋巴结为材料,经触片、瑞氏染色,镜检可见弓形虫滋养体;将该阳性病料腹腔接种BALB/c小鼠,经连续传代分离得到弓形虫虫株(命名为TgPJX13),用基于B1基因的半巢式PCR方法对该分离虫株进行鉴定,得到弓形虫的特异条带。测序表明,TgPJX13株扩增片段序列与NCBI中的弓形虫B1基因序列完全一致。用PCR-RFLP方法在11个基因位点(其中SAG1、SAG2、SAG3、5′+3′SAG2、BTUB、GRA6、c22-8、c29-2、L358和PK1为核基因位点,Apico为顶质体基因位点)对TgPJX13虫株进行基因型鉴定,确定该虫株的基因型为ToxoDB#9。弓形虫TgPJX13株的成功分离和鉴定为进一步研究其毒力及生物学特性奠定了基础。
2014年05期 v.44;No.441 453-457页 [查看摘要][在线阅读][下载 454K] [下载次数：317 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：3 ] - 伍妙梨;韩艳辉;曹晓丹;张旻;马帅;郭小勇;李长健;王馨茁;洪炀;陆珂;林矫矫;傅志强;
为掌握日本血吸虫钙调神经磷酸酶B亚基(CNB)特性并评估其作为候选疫苗分子的潜力,采用PCR方法扩增日本血吸虫CNB基因,构建重组质粒pET-28a(+)-CNB,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并用His-Bind亲和层析纯化获得重组蛋白rCNB。Western-blot结果显示,rCNB能被该重组蛋白免疫小鼠血清识别,具有较好的免疫原性。免疫组织化学分析表明,CNB主要分布在日本血吸虫虫体的睾丸、卵巢等生殖器官中,在表膜中也有少量分布。用重组蛋白rCNB结合ISA206佐剂免疫BALB/c小鼠,结果 rCNB诱导小鼠产生了27.93%(P<0.05)的减虫率和42.93%(P<0.01)的肝减卵率。结果表明,日本血吸虫CNB具有一定的免疫保护效果,为深入研究日本血吸虫钙调神经磷酸酶的生物学功能奠定了基础。
2014年05期 v.44;No.441 458-462页 [查看摘要][在线阅读][下载 474K] [下载次数：85 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：3 ] - 孙东杰;赵峰;张杰;
采用基因重组法将牛浮舰蛋白-2(Flotillin-2)基因的整个开放阅读框(ORF)克隆到真核表达载体pcDNA3.1(-)/Myc-His(B),通过脂质体法将重组质粒转入中国仓鼠卵巢(CHO)细胞,利用Western-blot分析目的基因的表达情况。为确定35ku的小蛋白来源,采用融合PCR法构建突变体,分别利用标签抗体和针对浮舰蛋白-2的抗体鉴定突变体表达蛋白的特性。测序结果表明,成功构建了Flotillin-2基因的全长ORF及其突变体mFlotillin-2的重组质粒。Western-blot结果显示,Flotillin-2基因的全长ORF在CHO细胞中表达时除出现与预期大小相一致的48ku目的蛋白带外,还有1个35ku的条带。基因序列分析发现,在第430~438位核苷酸存在1个似Kozak序列(CGCATGGGC)。将ATG突变成GCT(丙氨酸)后,Western-blot结果显示,突变前后35ku的小蛋白始终存在。本研究以pcDNA3.1(-)/Myc-His(B)为载体,实现了牛Flotillin-2基因的全长ORF的真核表达,证明了35ku小蛋白并不是由于重新起始翻译导致的,而可能是浮舰蛋白-2在翻译过程中的裂解产物。
2014年05期 v.44;No.441 463-469页 [查看摘要][在线阅读][下载 592K] [下载次数：62 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：1 ] |[阅读次数：3 ] - 张贺伟;王鑫;夏铭崎;刘阳欣;武华;
将病料与等体积2.5g/L胰酶溶液混合均匀,于37℃恒温培养箱中孵育1h,分别接种于MA-104、Marc-145、ST细胞系以分离病毒并筛选该毒株最适细胞系。通过RT-PCR以及重组质粒构建对其进行分子生物学鉴定以及遗传进化分析。结果显示,成功分离出猪A群轮状病毒LN-01-2013株,MA-104细胞系为其最适细胞系。LN-01-2013株的VP4基因型与P[7]基因型同源性最高,VP7基因型与G[9]基因型同源性最高。根据A群轮状病毒最新分类方法,LN-01-2013分离株属于P[7]G[9]型。
2014年05期 v.44;No.441 470-475页 [查看摘要][在线阅读][下载 692K] [下载次数：345 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：4 ] - 田志革;柴洪亮;李凤勇;孙晶;华育平;
为研究野鸭新城疫病毒V蛋白基因在真核细胞中的表达及V蛋白的亚细胞定位,将新城疫病毒V基因片段与pcDNA3.1载体连接,构建pcDNA3.1-V重组表达质粒,经脂质体转染DF-1细胞后,用Western-blot验证该基因在DF-1细胞中的表达;用激光共聚焦显微成像技术确定V蛋白在真核细胞中的分布及亚细胞定位。结果显示,重组质粒pcDNA3.1-V在外源真核细胞DF-1中获得了表达,表达蛋白主要聚集于细胞质。研究结果为进行野鸭源新城疫病毒V蛋白的功能研究奠定了基础。
2014年05期 v.44;No.441 476-479页 [查看摘要][在线阅读][下载 545K] [下载次数：174 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：3 ] - 何焱;谢红霞;杨岚;郝永清;
为评价金黄色葡萄球菌黏附素蛋白FnBPA A和FnBPA D基因表达产物的免疫原性,分别用纯化的重组原核表达蛋白FnBPA A和FnBPA D免疫新西兰白兔,通过ELISA方法检测免疫家兔血清的抗体效价,用双抗体夹心法检测细胞因子的表达水平及进行全血调理吞噬试验。结果显示,在三免后第7天抗体水平分别可达1∶12 800(FnBPA A)、1∶25 600(FnBPA D),并且FnBPA A免疫组的全血杀菌能力优于FnBPA D免疫组;同时,两者均能提高家兔体内IL-2、IL-4、IL-10和IFN-γ的表达水平,且FnBPA D组显著高于FnBPA A组(P<0.05)。结果表明,FnBPA D基因较FnBPA A基因更适合作为奶牛乳腺炎金黄色葡萄球菌基因工程亚单位疫苗的候选基因。
2014年05期 v.44;No.441 480-484页 [查看摘要][在线阅读][下载 535K] [下载次数：130 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：12 ] |[阅读次数：3 ] - 杨晓娇;周鹏;米荣升;黄燕;石凯;王晓娟;王向佩;刘宇轩;雷晓思;陈兆国;
为了构建微小隐孢子虫类钙调蛋白(calmodulin-like protein,CML)基因的真核表达质粒,并在Hela细胞中实现表达,以微小隐孢子虫卵囊cDNA为模板,通过PCR扩增CML基因,插入到克隆载体pMD18-T中。对经鉴定的pMD-CML重组质粒进行双酶切,将目的基因连接到经同样内切酶双酶切的真核表达载体pVAX1上。重组质粒经双酶切分析和测序鉴定后,用FuGENE HD转染试剂介导的方法,将重组表达质粒转染Hela细胞,用Western-blot技术和间接免疫荧光法检测外源基因的表达。结果显示,成功构建了微小隐孢子虫CML基因的真核表达质粒pVAX-CML,重组质粒在Hela细胞中实现了表达,表达产物具有良好的反应原性,为研究CML的特性和功能、寻找新的防控技术奠定了基础。
2014年05期 v.44;No.441 485-491页 [查看摘要][在线阅读][下载 557K] [下载次数：117 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：3 ] - 孙林;霍如松;王均华;李求春;潘志明;焦新安;
为了在大肠杆菌中克隆表达结核分枝杆菌rv1738基因,并制备针对Rv1738蛋白的小鼠多克隆抗体,以结核分枝杆菌H37Rv的基因组DNA为模板,PCR扩增rv1738基因,构建重组表达质粒pET-30a(+)-rv1738。重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导目的蛋白表达,通过镍柱亲和纯化重组蛋白,用SDS-PAGE鉴定目的蛋白的表达情况,并用Western-bolt分析表达蛋白的反应原性。最后,以纯化的Rv1738蛋白免疫C57BL/6小鼠制备多克隆抗体。结果显示,成功构建了原核表达载体pET-30a(+)-rv1738,经IPTG诱导在重组大肠杆菌中表达出分子质量为20ku的目的蛋白,并且以可溶的形式表达;对表达产物进行镍柱亲和纯化,获得了纯度较高的融合蛋白。重组蛋白Rv1738能与家兔抗H37Rv多抗血清发生特异反应,具有良好的反应原性。纯化的Rv1738蛋白免疫小鼠后,能有效地刺激特异性抗体的产生,血清ELISA效价达到1∶8 800,且具有良好的特异性。以上结果表明,成功克隆表达了结核分枝杆菌rv1738基因,并制备了针对Rv1738蛋白的小鼠多克隆抗体,这一结果为探索Rv1738蛋白在结核病疫苗开发和新型诊断试剂研制方面的潜能奠定了基础。
2014年05期 v.44;No.441 492-496页 [查看摘要][在线阅读][下载 519K] [下载次数：148 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 张旭亮;张振超;苏苗苗;孙悦;李鹏飞;徐立新;宋小凯;李祥瑞;严若峰;
根据旋毛虫醛缩酶(aldolase,ALD)基因序列设计1对特异性引物,以肌幼虫总RNA为模板,通过RT-PCR扩增肌幼虫的ALD基因。将该基因克隆到pMD18-T载体后进行序列测定和分析,再将该基因亚克隆到pET-32a(+)载体中,测序验证后转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导后用SDS-PAGE进行分析。结果显示,该基因与GenBank中旋毛虫醛缩酶基因的相似性高达99%。该基因在大肠杆菌中获得了表达,表达的融合蛋白大小约为57ku,重组蛋白在菌体上清和沉淀中均有存在。Western-blot分析显示,重组蛋白可被人工感染旋毛虫的大鼠血清所识别。通过3-磷酸甘油醛脱氢酶偶联法测定该重组酶的比活性,发现该重组蛋白的最佳反应温度和pH值分别为35℃和7.0。结果表明,该重组蛋白具有一定的抗原性和酶比活性。
2014年05期 v.44;No.441 497-502页 [查看摘要][在线阅读][下载 707K] [下载次数：134 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 张花景;蒋蔚;刘迎春;陈永军;李欣彤;石金磊;乔元彪;薛俊欣;张梦;王权;
为深入研究弓形虫烯醇化酶的生物学功能,根据已发表的eno2基因序列设计引物,通过RTPCR方法扩增弓形虫RH株的eno2基因。将eno2克隆到载体pET-28a(+)中后,重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,IPTG诱导表达并优化表达条件,SDS-PAGE分析表达情况,并通过Western-blot和间接免疫荧光试验(IFA)鉴定其免疫活性。结果显示,eno2基因全长1 353bp,编码444个氨基酸,与GenBank中登录的弓形虫烯醇化酶基因的核苷酸序列及其推导的氨基酸序列的同源性均高达99.8%,与其他物种的烯醇化酶的同源性较低。在pH7.5、28℃和IPTG终浓度0.1mmol/L条件下,重组蛋白ENO2得到高效可溶性表达,分子质量约为55ku。Western-blot结果显示,重组蛋白能被感染弓形虫的犬阳性血清识别,说明ENO2具有较好的反应原性,可以作为血清学诊断抗原。IFA表明,NO2在弓形虫的细胞质和细胞核中均有分布。结果表明,本研究成功获得了可溶性、具有良好免疫活性的弓形虫重组蛋白ENO2,为深入研究其生物学功能奠定了基础。
2014年05期 v.44;No.441 503-508页 [查看摘要][在线阅读][下载 637K] [下载次数：249 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：3 ] - 秦毅斌;卢冰霞;赵武;何颖;李莹莹;李斌;梁家幸;梁保忠;苏乾莲;蒋冬福;周英宁;
为建立猪流行性腹泻病毒(PEDV)变异毒株的快速RT-PCR检测方法,根据GenBank中PEDV S基因序列设计合成1对特异性扩增引物,通过优化反应条件,建立了检测PEDV变异毒株的RT-PCR方法。结果显示,建立的RT-PCR鉴别检测方法能特异性区分疫苗株CV777和PEDV变异毒株,仅能扩增出PEDV变异毒株826bp的目的片段,与猪传染性胃肠炎病毒、A群猪轮状病毒、猪嵴病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、伪狂犬病病毒、猪瘟病毒及猪细小病毒均无交叉反应。敏感性试验结果显示,该方法能检测到的最低核酸质量为11.3pg。利用该方法对采集自广西部分地区的123份临床腹泻样品进行检测,临床腹泻样品中PEDV阳性率为67.5%,变异毒株占总PEDV毒株的86.7%(72/83)。结果表明,该RT-PCR鉴别诊断方法特异性强、灵敏度高、操作简单,为猪流行性腹泻的流行病学及病原诊断研究提供了可供借鉴的技术手段。
2014年05期 v.44;No.441 509-514页 [查看摘要][在线阅读][下载 576K] [下载次数：622 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：32 ] |[阅读次数：3 ] - 王文玉;宋纪伟;曾范利;时坤;李健明;张云;刘东旭;俊伟;杜锐;
以本实验室保存的鹿体内分离并鉴定的结核病流行株为模板,利用重叠延伸剪接技术设计融合基因的引物,扩增融合基因Rv3872-Rv3874-Rv3875,构建重组表达质粒pGEX-4T-1-Rv3872-Rv3874-Rv3875;重组表达质粒被转化入大肠杆菌BL21(DE3)后,IPTG诱导表达,并采用谷胱甘肽琼脂糖亲和层析方法对目的蛋白进行纯化。基因测序结果显示,融合基因Rv3872-Rv3874-Rv3875的序列与GenBank中序列的符合率为99.89%。SDS-PAGE分析显示,融合基因在大肠杆菌中成功被诱导表达,获得以可溶形式表达的融合蛋白,该蛋白的分子质量约为60ku。Western-blot鉴定结果显示,纯化好的融合蛋白能与鹿结核病的阳性血清发生反应,说明该融合蛋白具有良好的反应原性,这一结果为它在鹿结核病血清学诊断中的应用奠定了试验基础。
2014年05期 v.44;No.441 515-520页 [查看摘要][在线阅读][下载 695K] [下载次数：106 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：3 ] - 龙玲;吴达;张银霞;肖西志;王军平;李儒;毛海岩;
为建立针对肺炎克雷伯氏菌、产色葡萄球菌、莫拉菌、睾丸酮丛毛单胞菌、炭疽芽胞杆菌和布氏杆菌的快速检测鉴定方法,提取上述6种菌的基因组DNA,然后以提取的DNA为模板,用16SrDNA的通用引物27f和1492r进行PCR扩增。用17种内切酶,即AvaⅠ、BgⅡ、BamHⅠ、DraⅠ、EcoRⅠ、EcoRⅡ、HindⅢ、Hinf、HpaⅠ、PstⅠ、SmaⅠ、TaqⅠ、XbaⅠ、XmaⅠ、AluⅠ、XhoⅠ和PvuⅠ,分别对6种菌的16S rDNA基因的扩增产物进行酶切。酶切产物经琼脂糖凝胶电泳分析。结果显示,每种菌形成了特异的16S rDNA RFLP指纹图谱。结果表明,建立的方法能够对6种细菌进行准确的鉴定,适用于口岸动物皮毛中6种细菌的快速鉴定。
2014年05期 v.44;No.441 521-526页 [查看摘要][在线阅读][下载 1069K] [下载次数：241 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：0 ] |[阅读次数：4 ] - 彭永刚;陈海迪;高旭;张颖;鲁承;张丽媛;于清洋;宋铭忻;
以本实验室构建的鹅pMD18-T-IFN-α载体为基础,利用PCR技术扩增得到鹅α干扰素(IFN-α)DNA,经BamHⅠ+SalⅠ双酶切,将其亚克隆到原核表达载体pET-30a上。将构建的重组质粒pET-30aIFN-α转化至大肠杆菌BL21(DE3)菌株,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE、Western-blot分析鉴定;用Ni柱亲和层析纯化目的蛋白,以纯化的重组蛋白作为抗原,免疫家兔制备多克隆抗体并进行鉴定。结果显示,PCR扩增出的鹅α干扰素基因全长576bp;成功构建了原核表达载体pET-30a-IFN-α并得到表达;经SDS-PAGE和Western-blot检测,该蛋白的分子质量约为29ku,以纯化后的重组蛋白为抗原免疫家兔,成功制备了多克隆抗体,血清效价为1∶32。本试验为研究鹅IFN-α的作用机理,开发有效防治鹅疾病的新型制剂奠定了基础。
2014年05期 v.44;No.441 527-531页 [查看摘要][在线阅读][下载 627K] [下载次数：128 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：3 ] - 田枫;崔燕;潘阳阳;魏博;禹尧;余四九;
为研究牦牛FGF18(fibroblast growth factor 18)基因的序列特性及其在子宫中的表达水平,根据黄牛FGF18基因序列5′端和3′端的保守性设计特异性引物,RT-PCR扩增之后通过基因克隆得到牦牛FGF18基因,利用生物学软件对其进行生物信息学分析,并采用实时荧光定量PCR(QRT-PCR)检测了FGF18基因在妊娠早期和非妊娠期牦牛子宫中的表达情况。结果显示,牦牛FGF18基因序列编码区长624bp,编码207个氨基酸,其中赖氨酸含量最高,约为9.7%;同源性分析和系统进化树显示,它与黄牛FGF18基因的同源性最高,为99.7%,表明FGF18基因在进化中具有高度保守性;编码产物的主要功能是胁迫应答和信号转导,与IL-1有相似的结构域,并且含有典型信号肽,整体表现为亲水性。QRT-PCR检测结果显示,FGF18基因在妊娠早期牦牛子宫中的表达量是非妊娠期子宫中表达量的24.7倍,说明FGF18蛋白在牦牛胚胎的早期发育中起着重要作用。
2014年05期 v.44;No.441 532-537页 [查看摘要][在线阅读][下载 1006K] [下载次数：183 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：3 ] - 余树民;李计尚;张于;廖纯颖;沈留红;姚学萍;曹随忠;
为了检测精子相关抗原11(sperm-associated antigen 11,SPAG11)基因在雄性牦牛生殖器官中的表达谱并分析其组织表达特性,从牦牛附睾头总RNA中RT-PCR扩增SPAG11基因(SPAG11C、D、E、U、V和W),半定量RT-PCR分析SPAG11mRNA在牦牛生殖器官中的表达水平。采用合成的SPAG11E多肽制备牦牛SPAG11E多克隆抗体,免疫组织化学检测SPAG11E蛋白在睾丸和附睾中的表达及定位情况。结果显示,SPAG11C、U、V和W基因在睾丸和附睾相对低表达,而SPAG11D和E基因相对高表达;SPAG11C和U基因在输精管相对低表达,而SPAG11E相对高表达;除SPAG11D在卵巢相对低表达外,SPAG11基因在其他雌性生殖器官均不表达。免疫组织化学结果显示,SPAG11E蛋白在睾丸的精子细胞和附睾内壁精子头部表达。结果表明,SPAG11基因的表达具有组织特异性,提示它在牦牛睾丸和附睾中可能发挥重要的免疫功能和生殖功能。
2014年05期 v.44;No.441 538-544页 [查看摘要][在线阅读][下载 847K] [下载次数：126 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：4 ] |[阅读次数：3 ] - 王天梓;刘艳艳;董春柳;闫明;陈俭清;盛尊来;李艳华;
以聚乙二醇4000(PEG 4000)及泊洛沙姆188(P 188)为联合载体,采用溶剂法制备吡喹酮固体分散体,通过体外溶出度曲线考察药物与载体比例对药物释放的影响,筛选出最优载体比例;通过X-射线衍射分析(XRD)、红外光谱分析(FTIR)以及扫描电镜方法(SEM)考察药物在载体中的存在状态。结果显示,当吡喹酮与联合载体的质量比为1∶5,m(PEG 4000)∶m(P 188)=3∶1时,吡喹酮固体分散体以无定形状态存在,体外释放度为100%。结果表明,以PEG 4000和P 188为载体,通过溶剂法制备吡喹酮固体分散体,可提高吡喹酮的体外释放度。
2014年05期 v.44;No.441 545-550页 [查看摘要][在线阅读][下载 940K] [下载次数：239 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：3 ] 下载本期数据