- 闻晓波;闫丽辉;曹殿军;刘培欣;刘春国;步志高;
将新城疫病毒(NDV)F48E9株的M、NP、F和HN基因克隆到真核细胞表达载体 pCAGG上,经酶切、PCR鉴定和序列分析,分别筛选出了含有M、NP、F和HN基因的重组质粒, 命名为pCAGG-M、pCAGG-NP、pCAGG-F和pCAGG-HN。纯化后的重组质粒通过脂质体单独转染HeLa细胞,经间接免疫荧光试验检测到了M、NP、F和HN蛋白的表达。pCAGG-M、 pCAGG-NP、pCAGG-F和pCAGG-HN重组质粒组合共转染HeLa细胞48 h后,可以观察到明显的细胞融合现象。试验结果表明,NDV F48E9株的M、NP、F和HN蛋白均在HeLa细胞内得到了成功表达,同时证明在该表达系统中F蛋白不足以诱导细胞融合。
2006年06期 429-433页 [查看摘要][在线阅读][下载 506K] [下载次数：261 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：26 ] |[阅读次数：2 ] - 王春来;刘思国;邵美丽;王勇;宫强;郭设平;刘建东;赵昆;迟磊;
将猪传染性胸膜肺炎放线杆菌ApxⅡ毒素的结构基因ApxⅡA克隆到原核表达载体 pGEX-6P-1,并在大肠埃希氏菌中进行了表达,表达产物rApxⅡA以包涵体形式存在。为了检测 rApxⅡA的免疫原性,分别用rApxⅡA、灭活疫苗以及灭活疫苗添加rApxⅡA对比利时白兔进行了免疫。免疫后进行攻毒,所用菌株分别为同型菌株(APP7型L25-4株)和异型菌株(APP1型 4074株)。结果,免疫动物对相同血清型菌株的攻击获得完全保护,且对异型菌的攻击也获得一定保护作用。表明,rApxⅡA蛋白具有良好的免疫原性,作为抗原成分添加到灭活疫苗中后可提高灭活疫苗的免疫效果。
2006年06期 434-438页 [查看摘要][在线阅读][下载 604K] [下载次数：139 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：22 ] |[阅读次数：3 ] - 吴立君;师东方;王丹娜;何海娟;吴明福;王君伟;
为研究牛病毒性腹泻病毒(BVDV)Erns基因的生物学功能,将含有牛病毒性腹泻病毒 Erns基因的质粒pMD18-T-Erns经BamH I／HindⅢ双酶切,获得了Erns片段,再与杆状病毒转移载体pBlueBacHis2A连接,构建成重组质粒。将重组质粒pBlueBacHis2A-Erns与Bac-N-BlueTM DNA 共转染至sf9昆虫细胞中,获得了重组病毒,经噬斑筛选纯化,感染sf9昆虫细胞进行表达。SDS- PAGE分析结果表明,表达的目的蛋白大小约30 ku;Western-blotting检测表明,该蛋白具有良好的抗原性。
2006年06期 439-443页 [查看摘要][在线阅读][下载 380K] [下载次数：239 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：5 ] |[阅读次数：4 ] - 郭宇飞;程安春;汪铭书;贾仁勇;文明;周伟光;陈孝跃;
根据已发表的鸭病毒性肠炎病毒(DEV)基因保守序列设计TaqMan探针,建立了检测 DEV的荧光实时定量PCR方法,用该法对DEV在鸭胚成纤维细胞(DEF)中的增殖进行了检测。结果显示,DEV接种DEF 22 h后开始释放,第50 h病毒在细胞和上清中的含量增幅均为1×103 左右,病毒主要存在于细胞中,其含量是上清的1×102-1×103倍。
2006年06期 444-448页 [查看摘要][在线阅读][下载 412K] [下载次数：337 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：53 ] |[阅读次数：3 ] - 蔡月琴;叶菊秀;李玲燕;周继勇;
为获得狂犬病病毒(RV)糖蛋白抗原,采用RT-PCR方法从狂犬病病毒ERA株中扩增了编码RV糖蛋白的全长基因,将其克隆于pMD18-T载体,再经PCR扩增出糖蛋白全长基因和膜外区基因,将其分别亚克隆至原核表达载体pET-28a(+)、pET-32a(+)和pGEX-4T-1中,经PCR 和双酶切鉴定以及序列分析,表明已成功构建了重组质粒。将重组质粒转化到大肠埃希氏菌BL21 (DE3)中进行表达,结果显示,克隆到pET-32a(+)的糖蛋白膜外区基因表达量最高,目的蛋白表达量占菌体总蛋白的45．4％。经Western-blotting检测,不同载体表达的糖蛋白膜外区产物均可与兔抗RV多抗发生特异性反应,表明,重组蛋白具有良好的反应原性。
2006年06期 449-453页 [查看摘要][在线阅读][下载 554K] [下载次数：152 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：17 ] |[阅读次数：3 ] - 康文玉;徐自忠;花群义;杨云庆;周晓黎;董俊;尹尚莲;高洪;
为获得山羊痘病毒膜蛋白重组P32抗原,根据其基因序列设计合成了1对特异性引物, 对CaPV P32基因进行了PCR扩增,产物大小约为969 bp;产物回收纯化后,将其克隆至pBAD／ Thio-TOPO载体中,转化TOP10大肠埃希氏菌感受态细胞,与已报道的多株CaPV P32基因序列的同源性高达99％;相应地,氨基酸序列同源性为98％。经测序筛选出阳性克隆,该重组菌株经 L-arabinose诱导,可稳定、高效地表达CaPV P32抗原。表达蛋白为融合蛋白,分子质量约 51．53 ku。
2006年06期 454-459页 [查看摘要][在线阅读][下载 551K] [下载次数：142 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：17 ] |[阅读次数：3 ] - 赵立波;谢鹏;牟君;李亚军;张小东;邹德智;刘庆军;
为了解重庆市山羊博尔纳病隐性带毒情况,分析博尔纳病病毒(BDV)的种系来源。采用巢式逆转录酶PCR结合荧光定量PCR(FQ-nRT-PCR)技术对重庆市60只山羊外周血单核细胞 (PBMCs)及脑组织中的BDV P24基因片段进行了检测,将阳性产物测序,并与国外BDV毒株进行了比较。结果,山羊外周血检测阳性率为8．3％(5／60),脑组织检测阳性率为10％(6／60)。该 BDV P24片段核苷酸序列与马源BDV H1766株同源性最高,达96．51％,与标准株Strain V和 He／80同源性为95．35％,并且编码的氨基酸序列也相同。表明,重庆市山羊中存在动物源性博尔纳病隐性带毒。该BDV P24核苷酸序列与Strain V和He／80株具有高度同源性。
2006年06期 460-463页 [查看摘要][在线阅读][下载 292K] [下载次数：47 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：24 ] |[阅读次数：3 ] - 曹素芳;黄青云;
将融合表达禽多杀性巴氏杆菌成熟外膜蛋白H(OmpmH)的重组菌pGEX-ompmH／ BL21大量培养,在最佳诱导条件下诱导表达,表达产物经蛋白酶剪切及亲和层析纯化,得到Ompm H基因的原核表达产物,将其与弗氏完全佐剂混合制成油乳剂亚单位疫苗,用该疫苗肌肉注射接种5周龄鸡,首免后每周采血检测抗体,二免后第2周用10 LD50禽多杀性巴氏杆菌强毒菌株C48-1 进行攻击。结果显示,OmpmH具有良好的免疫原性,能诱导鸡体产生特异性抗体,可抵抗强毒菌株C48-1的致死性攻击,免疫效果优于禽多杀性巴氏杆菌弱毒疫苗。
2006年06期 464-467页 [查看摘要][在线阅读][下载 325K] [下载次数：379 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：42 ] |[阅读次数：3 ] - 周双海;杨汉春;郭鑫;司兴奎;赵东升;
将猪圆环病毒2型(PCV2)BF株经口、鼻接种40日龄健康普通仔猪,于接种后不同时间宰杀,收集肺泡巨噬细胞(PAM),同时设立对照。用竞争PCR技术测定趋化性细胞因子IL-8和 MCP-1 mRNA水平,分析PCV2感染对其mRNA表达的影响。结果显示,与对照组相比,在 PCV2感染后第7 d,IL-8 mRNA水平下降至最低,随后迅速上升,至第14 d时达到高峰,而后快速下降,但仍维持较高水平;MCP-1 mRNA水平在攻毒后第3 d下降至最低,之后逐渐上升,至第14 d时达到高峰,而后下降,第21 d以后恢复正常。结果表明,PCV2感染初期可导致PAM趋化性细胞因子IL-8和MCP-1基因的转录明显下调。
2006年06期 468-471页 [查看摘要][在线阅读][下载 312K] [下载次数：225 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：20 ] |[阅读次数：3 ] - 蔡兰;黄兵;肖明;韩红玉;姜连连;赵其平;董辉;
为探讨抗球虫药物地克珠利和马杜拉霉素对柔嫩艾美球虫18 S rDNA的影响,分别对人工诱导的柔嫩艾美球虫地克珠利抗药株(ETAD)、马杜拉霉素抗药株(ETAM)和药物敏感株 (ETDS)孢子化卵囊的18 S rDNA基因进行了克隆测序,并通过生物信息软件进行对比差异分析。结果显示,ETAM株有3个碱基发生突变(T170突变为C,T646突变为C,G694突变为C); ETAD株有1个碱基发生突变(T646突变为C)。经进一步分析比较,发现ETAM株18 S rRNA 的二级结构与ETDS株的差异很大,而ETAD株18 S rRNA的二级结构则与ETDS株的完全相同。这些碱基的突变有可能是导致E．tenella产生抗药性的原因之一。
2006年06期 472-477页 [查看摘要][在线阅读][下载 358K] [下载次数：105 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：10 ] |[阅读次数：3 ] - 牛李丽;王强;杨光友;黄道超;姜波;赵波;余星明;邓家波;陈维刚;
对患溶组织内阿米巴原虫病而死亡的凹甲陆龟进行了系统的病理组织学观察,该病的病变主要发生在消化道、肝、心脏、肾、脾等部位,尤以胃肠道和肝病变最为明显,表现为卡他性-坏死性胃肠炎和坏死性-肉芽肿性肝炎,胃肠黏膜出血、水肿、上皮细胞变性、坏死脱落,形成溃疡灶; 肝细胞水泡变性,细胞核裂解,肝小叶内可见大小不等的结节性坏死灶,并伴有明显的炎症反应。
2006年06期 478-481页 [查看摘要][在线阅读][下载 549K] [下载次数：142 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：3 ] - 吕文发;袁天祥;孔振兴;
根据GenBank中牛肌肉生成抑制素(MSTN)基因序列设计了1对引物,在引物两端分别加EcoR I和Xho I识别位点。利用RT-PCR技术扩增出了牛MSTN功能区序列。分别构建克隆和原核表达载体,酶切、PCR鉴定及测序分析表明,该基因功能区序列的克隆载体和原核表达载体已成功构建。筛选阳性菌,经IPTG诱导,牛MSTN基因功能区在大肠埃希氏菌中成功表达。
2006年06期 482-484页 [查看摘要][在线阅读][下载 244K] [下载次数：154 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：3 ] - 陈武;谢淑敏;谢高基;黄勉;陈绚姣;廖明;
根据鸟类性染色体连锁基因EE0．6在Z、W染色体上长度的不同,通过选择6对不同的引物,同时设置4种不同的反应条件,分别采用PCR技术对丹顶鹤、黑鹳、琉璃金刚鹦鹉、绯红金刚鹦鹉、鞭苔(?)鵼、戴冕鹤、火烈鸟的Z、W染色体上的EE0．6基因进行了特异性扩增。结果显示,某些引物组合能从雄鸟样品中扩增出1条片段(EE0．6Z,190 bp),而雌性鸟样品则能扩增出2务片段(EE0．6W和EE0．6Z,分别为250 bp和190 bp),但4组引物对6种鸟类EE0．6基N的扩增效果不同。证实,利用PCR技术能对鸟类进行性别鉴定。
2006年06期 485-488页 [查看摘要][在线阅读][下载 300K] [下载次数：677 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：18 ] |[阅读次数：3 ] - 剡海阔;刘英;刘学荣;
为了解支配鸡肝的交感传出神经元的分布规律,将CT-HRP溶液注入鸡肝门周围区, 动物存活3-4 d后,经左心室灌流固定,取内脏神经节、肾上腺神经节及双侧胸、腰和荐段交感干神经节,制成50μm厚的连续冰冻切片,TMB法呈色反应,明视野显微镜下观察统计。结果发现, 支配鸡肝的交感传出神经元胞体位于内脏神经节(占41．9％)、肾上腺神经节(占41．7％)和T2- T7交感干神经节(占16．4%)。在交感干神经节中,标记细胞的峰值位于T5、T6交感干神经节。
2006年06期 489-492页 [查看摘要][在线阅读][下载 395K] [下载次数：30 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：4 ] - 陈自洪;杨素芳;谢英;李日聪;韦精卫;石德顺;
水牛卵母细胞体外成熟22 h后,分别用盲吸法、点击法和纺锤体成像系统(Spindleview System)去核。结果,三者的去核率分别为65．1％、81．8％和95．0％,差异极显著(P< 0．01)。以水牛胎儿成纤维细胞为供体,通过核移植构建的重构胚的融合率、分裂率和囊胚发育率, 在上述3种方法之间均没有显著差异(P>0．05)。认为点击法是一种较为简单、实用和有效的去核方法。
2006年06期 493-496页 [查看摘要][在线阅读][下载 288K] [下载次数：111 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：13 ] |[阅读次数：3 ] - 郑鑫;刘国文;杨连玉;李家奎;夏清娟;郝德威;王哲;
采用生长试验、免疫放射分析和定量PCR方法,观察了生长猪血液中类胰岛素生长因子(IGF-I)及其结合蛋白(IGFBP3)数量的变化和IGF-I基因在肝中表达量的变化。结果显示, 每1 kg饲料中添加125-250 mg铜,能够上调IGF-I基因的表达量,显著提高猪的平均日增重,促进生长猪循环血液中IGF-I浓度的增加。试验结果证实,铜是通过促进生长激素-胰岛素样生长因子轴相关因子的合成和分泌来发挥促生长作用的。
2006年06期 497-501页 [查看摘要][在线阅读][下载 331K] [下载次数：189 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：7 ] |[阅读次数：3 ] - 王泽洲;余勇;程江;谢智明;马孟根;李金海;陈斌;李春;
2005年7月,在四川省资阳、内江等地相继发现一种以发病急、高热、伴有头痛等全身性中毒症状,严重者出现中毒性休克、脑膜炎为主要临床表现的病例。几乎所有病例与病死猪有关。在1个月内,共报告人感染204例,其中死亡38例,分布在以资阳、内江为主的12个市37个县。经确诊系由猪链球菌2型引起。在此期间,猪发病死亡647头,分布在8个市21个县。
2006年06期 502-506页 [查看摘要][在线阅读][下载 402K] [下载次数：316 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：25 ] |[阅读次数：4 ] - 弓莉;顾为望;蔡建平;
从分子结构、基因结构及其染色体定位、信号转导等几方面概述了人类Toll样受体 (TLRs)的基本特点,并从比较生物学角度归纳了其他哺乳动物、禽类、鱼类等脊椎动物TLRs的研究进展。
2006年06期 507-511页 [查看摘要][在线阅读][下载 377K] [下载次数：157 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：2 ] |[阅读次数：3 ] - 马中军;马志宏;沈小燕;
从病毒干扰宿主免疫细胞对病毒抗原的摄取、递呈和杀伤等方面阐述了病毒抗感染免疫应答的研究进展。探讨了病毒感染宿主后,病毒对机体细胞免疫应答的抑制、对各种免疫杀伤细胞功能的阻断以及在宿主体内延续感染的机制。
2006年06期 512-514页 [查看摘要][在线阅读][下载 233K] [下载次数：106 ] |[网刊下载次数：0 ] |[引用频次：3 ] |[阅读次数：3 ] 下载本期数据