郑海学,男,1979年4月生,中共党员,博士,研究员,博导,现任中国农业科学院兰州兽医研究所所长、《中国兽医科学》主编、家畜疫病病原生物学国家重点实验室副主任、口蹄疫与新发病流行病学创新团队首席科学家,是农业部兽药评审专家,主要从事口蹄疫与非洲猪瘟等新发病的基础理论和防控技术研究。近五年,主持国家和省部级项目课题10项;以第一作者和通讯作者发表SCI论文60余篇;获疫苗类新兽药注册证书6项(其中国家一类1项)、诊断类新兽药注册证书1项;获授权发明专利19项。先后获第二届全国争先创新奖状、国家科学技术进步二等奖、甘肃省专利一等奖、求是杰出青年成果转化奖、甘肃省工业新产品一等奖、甘肃省青年科技奖、甘肃省科技进步一等奖等国家和省部级奖10项。培养博士和硕士研究生45名。


预防兽医学

  • 非洲猪瘟病毒RAA-CRISPR/LbCas12a检测方法的建立与初步应用

    李朝阳;胡文阳;党梦;魏战勇;朱河水;陈宇;

    本研究基于重组酶介导的扩增技术(recombinase-aid amplification,RAA),联合CRISPR/LbCas12a检测方法,筛选crRNA引物,对不同浓度阳性质粒、其他猪病病毒核酸样品、病料样品进行RAA扩增,随后进行荧光检测,探索检测ASFV的新方法。结果显示,RAA-CRISPR/LbCas12a检测方法的灵敏度达1×10~3copies/μL,不与其他病毒核酸样品产生交叉反应。利用RAA-CRISPR/LbCas12a方法对22份灭活的猪组织病料进行临床ASFV检测,同时进行qPCR平行检测。结果显示,两种方法的检测结果相同,同时检出18份阳性。综上所述,本研究建立的ASFV RAA-CRISPR/LbCas12a检测方法具有较好的敏感性和特异性,能够在1 h内对ASFV核酸进行判定,且较为方便,在临床ASFV检测中有着一定的应用前景,对于预防非洲猪瘟有一定的推动作用。

    2022年12期 v.52;No.544 1475-1481页 [查看摘要][在线阅读][下载 1023K]
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  • PCV2型和PCV3型双重荧光RAA鉴别检测方法的建立和应用

    吴江;林彦星;黄超华;曹琛福;刘明如;陈鹏;陈兵;阮周曦;张彩虹;曾少灵;史卫军;杨俊兴;花群义;

    本研究基于猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的Cap基因保守序列设计引物,利用双重重组酶介导等温扩增(recombinase-aided amplification,RAA)技术,建立了一种快速鉴别检测PCV2和PCV3的方法。结果显示,该方法特异性强,检测CSFV、PRV、FMDV和SVA病毒核酸时呈阴性反应;灵敏度高,PCV2和PCV3的最低检测限分别为481 copies/μL和583 copies/μL;本方法简便快速,反应时间短(小于15 min),重复性好。使用建立的方法对132份临床样品进行检测,结果与实时荧光PCR方法相符。上述结果表明,本研究建立的双重RAA方法操作简单、反应快速、结果可靠,适用于现场和实验室对PCV2和PCV3的快速鉴别检测。

    2022年12期 v.52;No.544 1482-1488页 [查看摘要][在线阅读][下载 1147K]
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  • 罗非鱼湖病毒逆转录重组酶介导链替换扩增(RT-RAA)快速检测方法的建立

    郑晓聪;陈雨;朱崧琪;吴山楠;周文川;刘荭;

    为建立针对罗非鱼湖病毒(TiLV)的逆转录重组酶介导链替换扩增(RT-RAA)快速检测方法,在NCBI建立的核酸序列数据库GenBank中获取TiLV全基因序列,以其假定蛋白基因片段为依据,设计上游引物3个、下游引物3个(交叉构建9组引物组合)和1条探针。构建TiLV的RNA标准品、筛选引物组和优化扩增温度后,分析该方法的特异性、灵敏性和重复性。结果显示,在TiLV RNA标准品基础上,确定F1/R3引物组和最佳温度为39℃,于20 min的短时间内,该方法即可检测出TiLV。该方法特异性强、灵敏度高,检测下限达到5.2×10~0copies/μL。30份临床样品中共检出2份阳性样品,检测结果与荧光定量RT-PCR结果相符。结果表明,本研究建立的RT-RAA检测方法可操作性强,重复性好,适用于TiLV的现场快速检测。

    2022年12期 v.52;No.544 1489-1495页 [查看摘要][在线阅读][下载 1189K]
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  • 非洲猪瘟MGF360-11L蛋白的原核表达及间接ELISA方法的建立

    奚媖牡;耿鑫梅;黄香梅;邹延林;卢丽飞;吴青萍;覃一峰;黄伟坚;

    本研究根据非洲猪瘟病毒(ASFV)HLJ/2018株(GenBank登录号:MK333180)MGF360-11L核苷酸序列,合成MGF360-11L基因序列,将其克隆至pET-32a(+)载体。测序正确后转入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达与纯化,纯化后的重组蛋白进行SDS-PAGE和Western-blot鉴定。以纯化的MGF360-11L重组蛋白作为包被抗原,建立了检测ASFV MGF360-11L抗体的间接ELISA方法。用建立的间接ELISA方法与法国ID-Vet非洲猪瘟抗体检测试剂盒分别对192份临床血清样品进行检测比较,结果显示,该间接ELISA方法的特异性为91.6%,敏感性为92.1%,符合率约为91.7%。表明,该间接ELISA方法敏感性高、重复性好和特异性强,可初步用于临床血清样品非洲猪瘟抗体的检测,该方法的建立为ASFV的快速诊断提供了更多选择,对非洲猪瘟的防控提供了技术支持。

    2022年12期 v.52;No.544 1496-1502页 [查看摘要][在线阅读][下载 1240K]
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  • 牛病毒性腹泻病毒和牛传染性鼻气管炎病毒及牛支原体三重Nano-PCR方法的建立与初步应用

    叶京飞;孙飞雁;赵立峰;薛力刚;伞智豪;郭利;程悦宁;

    为了同时检测临床上牛常见的三种呼吸道重要病原体,本研究针对牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)和牛支原体(MB)保守基因进行引物设计,并成功构建标准阳性质粒。使用纳米金颗粒将普通PCR方法优化,建立了三重Nano-PCR检测方法。结果显示,三重Nano-PCR检测方法可同时检测出BVDV、IBRV和MB的阳性质粒(1μL)最低检测分别为1 fg、100 ag、10 fg,灵敏度分别为常规PCR的10、10、100倍。临床结果显示,30份采集于临床呼吸道病牛样品中,BVDV、IBRV和MB的Nano-PCR的检测阳性率分别为33.33%、36.67%、33.33%,而普通PCR的检测阳性率分别为26.67%、30%、20%,提示BVDV和IBRV混合感染最多,阳性率可达26.67%。三重Nano-PCR方法特异性良好,检测其他牛呼吸道相关病原体BCV、BPIV3和BRV时结果均呈阴性。本研究建立的快速灵敏且特异良好的三重Nano-PCR检测方法可广泛应用于临床诊断和流行病学筛查。

    2022年12期 v.52;No.544 1503-1509页 [查看摘要][在线阅读][下载 1277K]
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  • 蓝舌病病毒小反刍兽疫病毒羊口疮病毒和山羊痘病毒多重荧光定量PCR检测方法的建立与应用

    勾倩倩;杜吉革;朱真;陈小云;赵辉;赵洋;钱莺娟;印春生;

    为建立一种能够同时检测蓝舌病病毒(BTV)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、羊口疮病毒(ORFV)和山羊痘病毒(CaPV)的方法,基于TaqMan探针技术,分别以NS3、N、F1L和P32为靶基因设计特异性探针和引物。以特异性引物扩增目的基因并构建重组质粒标准品。通过优化反应体系建立多重荧光定量PCR检测方法,并用此方法检测临床样品。结果显示,该多重荧光定量PCR标准曲线呈线性关系,对BTV、PPRV、ORFV和CaPV的扩增效率分别为100%、91%、91%、95%;该方法具有较高的灵敏性和特异性,对BTV、PPRV、ORFV和CaPV阳性质粒的最低检出量分别为17、12、8和9 copies/μL,与口蹄疫病毒、腐败梭菌、布鲁菌及弓形虫无交叉反应;其重复性较好,组间变异系数和组内变异系数均小于5%。对232份样品进行检测,用该多重荧光定量PCR分别检出9份BTV、3份PPRV、3份CaPV和24份ORFV阳性样品,而用常规PCR分别检出7份BTV、3份PPRV、0份CaPV、12份ORFV阳性样品。综上,该方法能够同时检测BTV、PPRV、ORFV和CaPV,可用于羊病的鉴别诊断、流行病学调查和疫病防控。

    2022年12期 v.52;No.544 1510-1517页 [查看摘要][在线阅读][下载 1518K]
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  • 三种鸽源病毒多重PCR检测方法的建立及初步应用

    倪维玲;孟利佳;乔思娜;陈立功;徐倩倩;侯绍华;董世山;

    为建立一种可以快速检测鸽疱疹病毒(Pi HV)、鸽圆环病毒(PiCV)和鸽源腺病毒(PiADV)的三重PCR方法,本研究针对3种病原的保守区域分别设计合成了3对特异性扩增引物,在优化反应体系、反应条件的基础上,分别对其特异性、敏感性和重复性进行验证,建立了能够快速检测以上3种病原的多重PCR方法,并对121份临床样品进行了检测。通过反应条件优化,确定PiHV、PiCV、PiADV引物体积比为1∶1∶2,退火温度为58℃时,扩增效果最好。敏感性试验显示,PiHV、PiCV和PiADV的最低检出量均为1.0×10~1copies/μL。特异性试验显示,建立的多重PCR方法与鸽新城疫病毒(NDV)、鸽痘病毒(PPV)、鸽轮状病毒(PiRV)没有特异性反应。利用本研究建立的多重PCR方法对121份临床样品进行检测,结果与单重PCR结果一致。综上所述,本研究建立的方法可用于鸽养殖场或公棚的PiHV、PiCV、PiADV快速检测。

    2022年12期 v.52;No.544 1518-1524页 [查看摘要][在线阅读][下载 1383K]
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  • 猪捷申病毒2型SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立

    赵宸辰;李玉莹;张昕宇;雷晓晓;黄海鑫;汪伟;郑敏;孙文超;兰添;

    猪捷申病毒2型(PTV2)属于小RNA病毒科、捷申病毒属,主要引起猪的脑脊髓灰质炎、肺炎、下痢、心包炎、心肌炎和繁殖障碍等症状。为了建立一种快速且灵敏的PTV2检测方法,本研究扩增VP1基因保守区域,建立PTV2的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法,并进行敏感性、特异性和重复性试验。结果显示,本研究建立的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法C_t值与标准品模板在1.21×10~9~1.21×10~1copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.996 7,斜率为-3.743 4。本试验检测灵敏度可达到1.21×10~1copies/μL。该方法对PRoV、TGEV、PDCoV等猪常见病原检测均无特异性扩增。该方法组内组间变异率小于1%。运用该方法进行样本检测,PTV阳性检出率为12.24%,普通PCR检出率为0。综上所述,本研究成功建立了PTV2 SYBRGreenⅠ荧光定量PCR检测方法,为快速准确检测PTV2提供了高效技术支持。

    2022年12期 v.52;No.544 1525-1530页 [查看摘要][在线阅读][下载 1446K]
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  • Ⅰ型猫疱疹病毒gB蛋白的截短表达及多克隆抗体的制备

    李娜;王真真;杜汉宇;贾楠楠;宋若楠;朱杰;李传峰;程松;梁留存;刘光清;孟春春;

    为获得免疫原性好的Ⅰ型猫疱疹病毒(FHV-1)gB截短蛋白和制备特异性的多克隆抗体,以用于检测gB蛋白的表达水平变化及FHV-1的血清学诊断技术研究,本试验截取gB蛋白的优势抗原区并插入pET-30a载体,构建原核表达质粒pET-30a-gB,测序正确后转入BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达。通过亲和层析纯化蛋白,将获得的重组蛋白免疫6周龄雌性新西兰大白兔制备多克隆抗体。采用固定病毒-稀释血清法测定多抗中和效价,使用FHV-1感染后的细胞样本进行间接免疫荧光和West-blotting检测其反应性和特异性。结果显示,成功构建了表达FHV-1截短gB蛋白的重组质粒pET-30a-gB,在37℃诱导8 h后主要以包涵体形式表达。中和试验结果显示,制备FHV-1 gB截短蛋白多克隆抗体中和效价为1∶48。间接免疫荧光和West-blotting试验结果表明,所制备多克隆抗体具有良好的反应性和特异性,可特异性检测出FHV-1感染细胞中的gB蛋白。结果表明,原核表达的gB截短重组蛋白具有良好的免疫原性,制备的多克隆抗体具有较高的中和效价以及较好的反应性和特异性,为进一步解析gB蛋白的生物学功能和建立FHV-1血清学诊断方法提供了生物材料保障。

    2022年12期 v.52;No.544 1531-1537页 [查看摘要][在线阅读][下载 1497K]
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  • 牛支原体MBOVPG45_0212的原核表达及其免疫原性分析

    白宇彤;黄志成;李章程;陈胜利;兰仕梅;李延召;刘爽;郝华芳;储岳峰;刘冠慧;

    为探究牛支原体MBOVPG45_0212蛋白的免疫学功能,以牛支原体基因组DNA为模板,PCR扩增MBOVPG45_0212基因并测序分析;经基因密码子优化后构建重组质粒pET-30a-0212,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达,用Ni-NTA纯化目的蛋白,Western-blot验证纯化的重组蛋白与牛支原体不同血清的反应情况;将纯化蛋白免疫小鼠后制备多克隆抗体,Western-blot测定多克隆抗体是否识别牛支原体天然蛋白。PCR结果显示,MBOVPG45_0212基因全长约1 014 bp;pET-30a-0212重组质粒在大肠杆菌中于16℃经0.02 mmol/L IPTG诱导12 h能成功表达大小约43 ku的目的蛋白;纯化蛋白与牛支原体感染血清、免疫血清均能产生特异性反应,免疫小鼠血清效价达到1∶51 200以上,显示重组MBOVPG45_0212蛋白具有良好的免疫原性和反应活性。获得纯化重组MBOVPG45_0212蛋白,并制备其高效价的多克隆抗体,为其后续生物学功能研究奠定了基础。

    2022年12期 v.52;No.544 1538-1544页 [查看摘要][在线阅读][下载 1497K]
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  • 非洲猪瘟病毒解旋酶Q706L基因的生物信息学分析及原核表达

    王国超;张忠辉;白鸽;赵亚茹;吴奇强;王一望;孙华林;杨吉飞;关贵全;殷宏;罗建勋;牛庆丽;

    为了解非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)解旋酶pQ706L的功能,通过生物信息学方法对GenBank中公布的不同基因型的ASFV解旋酶Q706L基因序列进行分析,运用在线软件ExPASy、GOR4、SWISS-MODEL对该蛋白的理化性质及结构进行了预测分析,并进一步构建原核表达载体进行诱导表达及纯化鉴定。结果显示:Q706L基因长度为2 121 bp,在不同毒株和基因型间高度保守;经ExPASy预测,pQ706L蛋白的分子式为C_(6440)H_(10761)N_(2121)O_(2643)S_(502),属于疏水性蛋白,稳定性差;GOR4预测的二级结构显示,α螺旋是其主要结构形式,占比为42.07%;三级结构预测报告QMQE值为0.38,覆盖率为66%。以ASFV-CN/SC/2019毒株基因组为模板,成功构建了原核表达质粒pET-30a-Q706L,进行诱导表达及SDS-PAGE分析,得到78.3 ku的蛋白。纯化后经Western-blot鉴定,获得了纯度较高的目的蛋白,该蛋白且能够与ASFV阳性血清发生特异性反应。上述研究结果为进一步解析该蛋白的功能奠定了基础。

    2022年12期 v.52;No.544 1545-1551页 [查看摘要][在线阅读][下载 1573K]
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  • 非洲猪瘟病毒A151R蛋白核定位信号的鉴定

    王裴;倪温碧;钟桂芳;胡伯里;周继勇;

    为研究非洲猪瘟病毒(ASFV)非结构蛋白A151R发挥功能的亚细胞定位,通过荧光显微镜观察发现,A151R蛋白能够聚集在细胞核内。使用在线软件预测A151R中存在的核定位信号(NLS),并构建缺失NLS的A151R质粒。荧光共聚焦显微镜观察结果表明,缺失NLS的重组A151R蛋白A151RΔNLS无法进入细胞核。细胞核质分离结果显示,NLS序列能够协助EGFP进入细胞核,证明了NLS的核输入能力。以上证据均表明A151R依赖于NLS进入细胞核,为进一步研究其在ASFV复制中的功能提供了重要的信息。

    2022年12期 v.52;No.544 1552-1557页 [查看摘要][在线阅读][下载 1604K]
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  • 旋毛虫不同虫期收集方法的比较

    甄晶博;郑芦珊;杨莹;王瑞彪;张玉恒;孙凤;林立浩;路义鑫;

    为了满足旋毛虫研究中对收集到的不同虫期虫体的数量、活力、纯净度等质量需求,基于相关文献中不同虫期虫体的收集方法,进行适当优化,比较了各收集方法的耗时长短、难易程度、收集的虫体数量及其感染力等,并总结出应用于不同实验需求的最适收集方法。同时,通过荧光定量PCR方法检测旋毛虫新生幼虫期特异性基因T668(AF331160.1)在不同时期各组织器官中的表达量,来间接反映移行期新生幼虫的含量,为后续描绘新生幼虫在动物体内的移行路径以及移行幼虫的研究提供新思路。研究结果表明:用贝尔曼静置法收集的肌幼虫的活力和侵袭力最强,用贝尔曼搅拌法收集的肌幼虫死虫数量最少,以生理盐水作为消化液更佳,用常规孵育装置收集法收集的成虫的数量最多,用离心法收集的新生幼虫的数量最多,用自然沉淀法收集的新生幼虫的感染力最强;旋毛虫雌虫在回肠和攻虫后第5天时数量最多;第4天时肺和后腿肌中移行期新生幼虫含量较多,第8天时在心、肾、舌肌、膈肌中较多,第12和15天时在心中最多。研究结果为满足不同实验需求,提供了虫体的最适收集方法。

    2022年12期 v.52;No.544 1558-1567页 [查看摘要][在线阅读][下载 1901K]
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  • 禽致病性大肠杆菌噬菌体vB_EcoS_AH50的分离鉴定、生物学特性及全基因组分析

    姚澜;张贝贝;王芷洋;郭伟奇;王帝;王欣宇;胡剑刚;祁晶晶;田明星;李海花;王少辉;

    为给噬菌体防控禽大肠杆菌病提供参考和依据,以禽致病性大肠杆菌为宿主菌,利用双层琼脂平板法从鸡场粪便样品中分离纯化禽致病性大肠杆菌噬菌体,对其形态、裂解谱、最佳感染复数(MOI)、一步生长曲线、p H和温度稳定性、体外抑菌能力及抑制生物被膜形成能力进行测定,并通过全基因组测序分析其基因组特征。结果显示,分离到1株裂解性禽致病性大肠杆菌噬菌体v B_EcoS_AH50,透射电镜观察显示其属于有尾噬菌体目长尾噬菌体科。v B_EcoS_AH50可特异性裂解O1和O2血清型大肠杆菌;MOI为1;潜伏期和爆发期均为20 min,爆发量约为76 PFU/cell;在4~50℃和pH值在3~11的范围内可保持较强的裂解能力,且在室温下能稳定存活4周。在MOI分别为0.01、0.1和1的条件下,该噬菌体能够有效抑制大肠杆菌生长及形成生物被膜。全基因组测序发现,v B_EcoS_AH50基因组全长为37 268 bp,不含有与毒力因子、毒素、耐药和溶源性相关基因。BLASTn比对显示,该噬菌体全基因组序列与噬菌体PC2最为相近,具有94.56%的一致性和94%的覆盖率。基于噬菌体末端酶大亚基构建的系统发育树显示,v B_EcoS_AH50与噬菌体v B_EcoS_011D5的亲缘关系最近。结果表明,噬菌体v B_EcoS_AH50可特异性裂解大肠杆菌,裂解能力强、耐受性高、安全性好,提示其在防治禽大肠杆菌病方面均有潜在应用价值。

    2022年12期 v.52;No.544 1568-1577页 [查看摘要][在线阅读][下载 1997K]
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  • 布鲁氏菌病及其在我国的防控现状与建议

    汪洁英;宁博;景伟;高建平;曹莹;王雪梅;刘帅;马永红;景志忠;

    布鲁氏菌病(简称布病)已成为世界上最流行的细菌性人兽共患病,在牲畜健康、生产和公共卫生方面造成了巨大的损失,极大地限制了流行国家特别是我国的经济发展、人类健康和社会进步。本文简要介绍了布病的病原学、流行病学、临床表现及诊断治疗技术和疫苗的研究现状,重点聚焦动物和人间布病综合防控措施的介绍,以期通过“One Health”理念应用于布病防控,构建医学、兽医学协调一致的布病疫苗免疫接种、检疫与净化和科普宣传教育为主的综合性防控机制,从动物无疫、环境生物安全和人类健康角度出发,积极推动多领域,多部门和多学科的合作,为从动物源头防控、阻断和消除布病传播提供新思路。

    2022年12期 v.52;No.544 1578-1585页 [查看摘要][在线阅读][下载 1691K]
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基础兽医学

  • 檀香醇对猪多杀性巴氏杆菌DCS株的抑菌效果及作用机制的研究

    刘鑫;许文博;吴丽梅;李升;黄复深;

    为了探讨檀香醇对多杀性巴氏杆菌(Pm)的抑菌效果,以Pm DCS分离株为研究对象,采用倍比稀释法测定了檀香醇对Pm DCS株的最小抑菌浓度(MIC50),利用小鼠检测檀香醇的体内抑菌效果。同时分别利用实时荧光定量PCR(qPCR)及聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测檀香醇对Pm DCS株细胞分裂相关基因和核糖体基因的表达及细菌蛋白表达的影响。结果显示,Pm DCS株对小鼠的LD50为1×105CFU/m L,檀香醇对Pm DCS株的MIC50为128μg/m L。每只经256和512μg檀香醇处理24 h的Pm DCS株感染小鼠,肺部细菌计数明显低于生理盐水组小鼠。细菌经64、128、256μg/m L檀香醇处理24 h后,菌体蛋白的表达量降低。qPCR检测结果显示,Pm DCS株经檀香醇处理后,体内ftsZ、ftsW、zipA和slmA基因的表达量极显著降低(P<0.01),rpoE、rpmJ、rpsJ、rpsI和rpsA基因的表达量显著降低(P<0.05),rpsC和rpsO基因的表达量显著升高(P<0.05)。可见,檀香醇可通过降低细菌的细胞分裂相关基因的表达量而干扰细菌细胞的分裂,同时通过扰乱核糖体基因对细胞某些蛋白的表达,从而产生抑菌作用。

    2022年12期 v.52;No.544 1586-1591页 [查看摘要][在线阅读][下载 1963K]
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  • 兽用异噁唑啉类抗外寄生虫药物的研究进展

    张欣欣;史梦艳;陈玲玲;翟斌涛;张继瑜;李冰;

    异噁唑啉是一类新型的体外杀虫剂,通过抑制无脊椎动物神经系统中的谷氨酸和γ-氨基丁酸门控氯离子通道发挥杀虫作用。近年来,国内外已经有异噁唑啉类化合物抗外寄生虫(包括蜱虫、跳蚤和螨虫等)药物被批准上市。本文对已上市的异噁唑啉类药物的作用机制、联合用药、药代动力学及临床药效等方面进行综述,以期对此类药物进一步的应用及开发提供参考。

    2022年12期 v.52;No.544 1592-1599页 [查看摘要][在线阅读][下载 1768K]
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临床兽医学

  • 抑制Caspase-1活化能减弱玉米赤霉烯酮诱导的猪小肠上皮细胞凋亡

    宋超;任晓丽;靳双星;皇甫和平;董青;李新锋;张爱国;石冬梅;王俊东;彭巍;张曼;

    为探究玉米赤霉烯酮(ZEA)对猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)毒性机制中细胞焦亡与凋亡间的关系,用不同质量浓度的ZEA(0、5、10、15μg/m L)处理细胞24 h以及ZEA(15μg/m L)与乙酰半胱氨酸(NAC,1 mmol/L)或Z-YVAD-FMK(10μmol/L)联合作用24 h。采用CCK-8法检测存活率;微板法测定细胞上清中乳酸脱氢酶(LDH)含量水平;免疫印迹检测剪切的半胱天冬氨酸蛋白酶-1(Cleaved Caspase-1)蛋白水平;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和ELISA测定白细胞介素(IL)-18和IL-1β水平;流式细胞术检测活性氧(ROS)水平和细胞凋亡率;免疫荧光检测Caspase-3表达水平。结果显示,ZEA引起IPEC-J2细胞存活率降低和LDH含量升高,呈剂量依赖性(P<0.05,P<0.01)。与0μg/m L组比较,ZEA处理后细胞中剪切的Caspase-1、IL-18和IL-1β水平均明显升高(P<0.05,P<0.01)。NAC孵育显著降低了ZEA处理细胞的ROS水平、剪切的Caspase-1蛋白表达以及IL-18和IL-1β含量,较ZEA组差异显著(P<0.01)。与ZEA组相比,Z-YVAD-FMK+ZEA组细胞存活率明显升高(P<0.01),而LDH含量、Caspase-3表达以及细胞凋亡水平则显著降低(P<0.01)。结果表明,活化的Caspase-1参与了ZEA诱导的IPEC-J2细胞凋亡。

    2022年12期 v.52;No.544 1600-1608页 [查看摘要][在线阅读][下载 1967K]
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